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如何提取及測定海帶中的葉綠素
如何提取及測定海帶中的葉綠素
海帶是一種營養(yǎng)價(jià)值很高的蔬菜,由于海水可被利用的光能要比陸地上少得多,要完成能量的轉(zhuǎn)換,必須增高參與光合作用的葉綠素的含量。所以,一般來說,海帶中葉綠素和其他輔助色素的含量高于陸生植物。葉綠素依其結(jié)構(gòu)不同可分為葉綠素a和葉綠素b,其基本結(jié)構(gòu)都是鎂結(jié)合的卟啉環(huán)。當(dāng)前測定葉綠素的常規(guī)方法多為溶劑浸提-可見分光光度法,用超聲波萃取分離出葉綠素,然后用氫離子置換出鎂離子,再用原子吸收分光光度法測鎂的量即可計(jì)算出海帶中葉綠素的含量,以及專業(yè)的葉綠素測量儀法。這些方法都是葉綠素測定的最常用方法,我們在具體操作過程中,要按照不同的需求,進(jìn)行合理的選擇。
葉綠素提取方法:稱取4g粉碎后的海帶于燒杯中,加入30mL有機(jī)提取劑,用保鮮膜封口,室溫200W超聲波提取20min,過濾,收集濾液。移取8mL濾液于分液漏斗中,加入4mL的石油醚和等量飽和氯化鈉溶液萃取,加12mL的超純水洗滌有機(jī)相,重復(fù)萃取兩次,洗去提取溶劑及無機(jī)態(tài)鹽類,合并石油醚相。于石油醚相中加入0.9mol/L鹽酸15mL反萃取15min,分取水相,用超純水定容于50mL容量瓶中,用原子吸收分光光度計(jì)測定此溶液中鎂的質(zhì)量濃度。測定條件為空氣-乙炔火焰,鎂波長285.2nm,狹縫寬度0.2nm,燈電流3mA,燃燒器高度5.0mm。原子吸收法測定海帶中葉綠素含量的計(jì)算,見式(1)。葉綠素含量/(mg/g)=[C×V1×899.3×V3]/V2×m×24×1000(1)。式中:C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得被測試液中鎂的質(zhì)量濃度/(μg/mL);m為稱樣量/g;V1為混合提取液的總體積/mL;V2為移取石油醚相的體積/mL;V3為返萃水相的定容體積/mL;899.3為葉綠素a、葉綠素b的平均摩爾質(zhì)量/(g/mol);24為鎂的摩爾質(zhì)量/(g/mol)。
采用超聲波提取法對(duì)海帶中葉綠素進(jìn)行提取,原子吸收光譜法對(duì)提取出的葉綠素中的鎂離子進(jìn)行測定,從而間接得出海帶中葉綠素的含量。結(jié)果表明,超聲波提取葉綠素的最佳工藝條件:以無水乙醇與丙酮體積比1:1的混合液為提取劑,按料液比2:15(g/mL),在室溫下超聲波選擇200W的功率提取2次,每次20min。反萃取的最佳測定工藝條件:用濃度為0.9mol/L的鹽酸15mL進(jìn)行反萃取15min。原子吸收法測定檢出限為0.008μg/mL,海帶中葉綠素的含量5.486mg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.675%,回收率97.7%。此方法表明:原子吸收光譜法受干擾程度小,且精密度、靈敏度和準(zhǔn)確度較高。
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