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種子DNA提取儀對云南紫蘇的種子DNA提取

來源： http://www.lanfenlanmi.cn/ 　類別：技術(shù)文章　更新時間：2015-11-14　閱讀次

　　云南各地收集到20份紫蘇品種并進行了多年的栽培和經(jīng)濟性狀評估,發(fā)現(xiàn)在紫蘇種內(nèi)存在著豐富的遺傳變異,并且已用形態(tài)聚類分析的方法對云南境內(nèi)紫蘇的種下變異進行了探討,將其分為5個變種。由于形態(tài)特征是基因型和環(huán)境相互作用的產(chǎn)物,紫蘇的形態(tài)聚類分析結(jié)果僅從表現(xiàn)型上間接地反映出了云南境內(nèi)紫蘇的遺傳多樣性。試驗以云南紫蘇種子為材料,研究了紫蘇基因組DNA的提取和RAPD引物篩選,為從DNA多態(tài)性角度直接揭示云南紫蘇的遺傳多樣性奠定了基礎(chǔ)。種子DNA提取儀是對種子DNA進行提取的重要儀器。
　　
　　種子DNA提取儀在該研究中發(fā)揮了重要的作用，紫蘇種子DNA的提取參照改進的提取煙草DNA的CTAB法,略有改動,試劑均為國產(chǎn)分析純。取0.1～0.2g種子,置于經(jīng)-20℃冰箱降過溫的研缽中磨碎,轉(zhuǎn)入1.5mL的離心管中,加入0.35mL的55℃預(yù)熱過的1×DNA提取液(50mmol/LTris-HClpH7.5,10mmol/LEDTApH8.0,0.7mmol/LNaCl,1%β-巰基乙醇,1%CTAB),3min后加入2×DNA提取液(濃度為前者的兩倍),放入55℃培養(yǎng)箱中過夜,其間顛倒數(shù)次,加入0.7mL飽和酚,在自制的混勻器(2r/min)上混勻抽提3h,6000r/min下離心10min,將上清液轉(zhuǎn)入至另一管中,加入0.35mL飽和酚和0.35mL氯仿-異戊醇(24∶1)抽提2h,6000r/min下離心10min,取上清液至另一管中,加入0.7mL氯仿-異戊醇(24∶1)抽提2h,6000r/min下離心10min,取上清液至另一管中,加入0.07mL3mol/LNaAc和0.7mL異丙醇,室溫下沉淀30min,3000r/min下離心5min,棄上清液,用70%酒精洗滌DNA,晾干后加入100μLTE溶解。
　　
　　在植物分子標記研究中,種子DNA提取儀提取基因組DNA一般都以新鮮的幼嫩葉片作材料,極少見到用成熟種子作材料提取基因組DNA的報道。由于紫蘇葉片含有豐富的紫蘇色素和酚類物質(zhì),不經(jīng)特殊處理很難獲得高質(zhì)量的基因組DNA,于是我們嘗試用紫蘇種子作材料,用改良的CTAB法來提取紫蘇的基因組DNA.

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